植物無(wú)毒基因AvrRpt2表達(dá)、蛋白質(zhì)純化分析及結(jié)晶條件的探索.pdf

1、病原菌侵染宿主過(guò)程中，抑制宿主防御反應(yīng)是極為關(guān)鍵的一步，病原菌借此得以在宿主內(nèi)存活及繁殖。很好的一個(gè)例子就是假單胞耶爾森菌分泌的效應(yīng)蛋白AvrRpt2對(duì)宿主“基因?qū)颉狈烙磻?yīng)的抑制。效應(yīng)蛋白AvrRpt2是一種蛋白酶，經(jīng)三型信號(hào)分泌系統(tǒng)進(jìn)入宿主后識(shí)別并酶切宿主蛋白R(shí)IN4。RIN4的降解使宿主抗病蛋白R(shí)PM1的防御反應(yīng)，并無(wú)法檢測(cè)假單胞耶爾森菌中另外的兩種效應(yīng)蛋白AvrB and AvrRpml。效應(yīng)蛋白AvrRpt2在病原菌內(nèi)以酶

2、原形式合成，以保護(hù)不對(duì)自身產(chǎn)生毒害，進(jìn)入宿主后才被其分子伴侶活化。雖然AvrRpt2的遺傳學(xué)和生物化學(xué)性狀已經(jīng)研究得較為透徹，對(duì)它活化以及催化底物的機(jī)制仍不清楚。為了對(duì)這些問(wèn)題予以解答，我們目前致力于解決AvrRpt2的晶體結(jié)構(gòu)以及其與ROC1、 RIN4的復(fù)合物晶體結(jié)構(gòu)。為獲得AvrRpt2-ROC1復(fù)合物晶體，我們將AvrRpt2蛋白催化中心點(diǎn)突變，與ROC1混合后進(jìn)行純化。遺憾的是在凝膠層析的過(guò)程中，兩者并沒(méi)有形成穩(wěn)定的復(fù)合物。這