Enterococcus faecalis磷酸甘油氧化酶基本性質(zhì)的研究.pdf

1、核糖體小亞基RNA(16S rRNA)基因?yàn)樗械募?xì)菌共有，且其與細(xì)菌整個(gè)基因組的變化相比，具有高度的保守性。因此用16S rDNA保守區(qū)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，可快速檢測細(xì)菌。本文用16S rDNA的PCR方法并結(jié)合其它形態(tài)學(xué)方法，對(duì)篩選出的產(chǎn)磷酸甘油氧化酶(GPO，EC 1．1．3．21)細(xì)菌進(jìn)行了鑒定，確定為 Enterococcus faecalis(糞腸球菌)。通過發(fā)酵罐擴(kuò)大培養(yǎng)，經(jīng)離心收集菌體，超聲波破碎，40％～80％硫酸銨沉

2、淀法或雙水相萃取，繼而采用Q-Sepharose FF、 Phenyl-Sepharose CL-4B、Chelating Sepharose FF和Sephacryl S-200HR層析純化，純化的GPO在還原、非還原SDS-PAGE中顯示單一條蛋白著色帶，對(duì)應(yīng)的表觀分子質(zhì)量為67．6 kDa，用HPLC測得其表觀分子質(zhì)量為121 kDa，綜合分析推測該酶由2個(gè)分子質(zhì)量相同的亞基以非共價(jià)鍵聚合組成。GPO的最適反應(yīng)溫度為35℃，最適p